Pesquisador Walter Castanha
Não destacado o suficiente no artigo: D-Glucosamina diminuiu significativamente a expressão da proteína Spike.
GlcN (N-Acetil-D-Glucosamina) aumenta a sinalização de IFNs induzida por SARS-CoV-2 e exibe uma actividade antiviral de largo espectro contra HCoVs. a As pilhas de Calu-3 foram tratadas com GlcN durante 3 h a 20 mM, infectadas com SARS-CoV-2 (MOI = 1) durante 4 e 24 h. O immunoblotting da espícula do SARS-CoV-2 e do nível de O-GlcNAcylation foram realizados. b As pilhas de Calu-3 foram tratadas com GlcN durante 3 h a 20 mM, infectadas com SARS-CoV-2 a um MOI de 0,1 ou 0,5. O sobrenadante infeccioso foi coletado 24 h após a infecção. Os títulos virais foram medidos. c, d células Calu-3 foram tratadas com GlcN por 3 h a 20 mM, infectadas com SARS-CoV-2 (MOI = 1) por 6, 16 e 24 h. Análise do nível de RNA de SARS CoV-2 em células c, título de vírus no sobrenadante d foram realizadas. As células Calu-3 foram tratadas com GlcN variando de 0,1 a 40 mM por 3 h, infectadas com SARS-CoV-2 (MOI = 1) por 24 h. As células foram coradas para a proteína N do SARS-CoV-2 e imageadas. A porcentagem de coloração SARS-CoV-2 foi quantificada como mostrado. As células f–j Calu-3 foram tratadas com GlcN por 3 h a 20 mM, infectadas com SARS-CoV-2 por 6, 16, 24 e 48 h. Immunoblotting de SARS-CoV-2 spike, IRF3 fosforilado e TBK1 foram realizados f. Foi realizada análise por qRT-PCR da expressão de IFN-β g, IFN-α2 h, IFN-λ1 i e IFN-λ2/3 j.
O título viral do SARS-CoV-2 usado em (a, c, d, f–j) foi de 3,5 × 106 PFU/mL, usado em b, e foi de 1,73 × 106 PFU/mL. k Diagrama esquemático do experimento com camundongos. Camundongos Balb/c com 6 semanas de idade receberam GlcN (350 mg/kg) por 3 dias por 2 dias. Os ratos foram infectados com a estirpe SARS-CoV-6 MASCp3 intranasalmente. Infecção por 2 dias, camundongos foram sacrificados e tecidos foram coletados. l, m camundongos foram tratados como k. qRT-PCR análise do nível de RNA SARS-CoV-2 em seções de pulmão l e traqueia m foram realizadas. n Análise corada pelo H&E mostrando infiltrado de células inflamatórias (seta vermelha), espessamento de septos alveolares (seta amarela) e exsudação de fibrina (seta verde) em pulmões de camundongos tratados como K. O título de vírus de SARS-CoV-4 usado em l-n foi de 105 × 3 PFU/mL. o, p As células Calu-0 foram tratadas com GlcN variando de 1,20 a 3 mM por 229 h, infectadas com 1E (107 × 1 UFP/mL) em um MOI de 24 por 50 h. RNA e sobrenadante infeccioso foram coletados. As curvas dose-resposta de GlcN são mostradas e a CE229 é indicada acima da curva o. A porcentagem de infecção por 3E calculada pelo RNA viral é mostrada como indicado p. q, r As células Calu-3 foram tratadas com GlcN por 20 h a 229 mM, infectadas com 43E ou OC1 a um MOI de 6 para 18, 24, 30, 229 h. A análise de qRT-PCR da expressão do RNA 43E q e OC0 r foi realizada. Os resultados da qRT-PCR são apresentados em relação aos do GAPDH g–j. Os dados foram apresentados como médias ± EPM l, m, médias ± DP b–e, g–j, o–r de triplicatas (réplicas biológicas), *p < 05,0, **p < 01,0 e ***p < 001,<> (teste t de Student bicaudal)
Acredito que esta é uma descoberta importante que não só pode prevenir a infecção por/gravidade da COVID, mas também pode reduzir drasticamente a expressão da proteína spike por nossas células.
Uma carta ao editor foi publicada na terça-feira que mostrou que um suplemento muito comum, seguro e prontamente disponível era muito poderoso na inibição da replicação do SARS-CoV-2. Ele faz isso aumentando a expressão do sempre importante Interferon. Como os leitores podem estar cientes, foi prontamente provado que os defeitos na resposta ao interferon são um fator crítico no desenvolvimento de COVID grave.
Vamos olhar para os mecanismos de como a D-glucosamina inibe a replicação do SARS-CoV-2.
Recentemente, identificamos que a O-GlcNAcylation, uma modificação pós-traducional derivada da via biossintética da hexosamina (HBP), é essencial para a ativação do MAVS induzida por vírus e sinalização de IFN. Demonstramos que a D-glucosamina (GlcN), um suplemento dietético comumente usado, aumenta a O-GlcNAcylation da MAVS e aumenta a sinalização de IFN mediada por MAVS, exibindo assim uma atividade antiviral de amplo espectro.6 Nesta comunicação, exploramos a potencial atividade antiviral de amplo espectro da GlcN contra HCoVs. Nós estabelecemos primeiro o modelo da infecção SARS-CoV-2 usando a linha da pilha epitelial do pulmão humano Calu-3 e a linha da pilha do cancro do fígado humano Huh7, respectivamente. As células Calu-3 ou Huh7 foram tratadas com GlcN (a uma concentração final de 20 mM) durante 3 h, infectadas com SARS-CoV-2 a uma multiplicidade de infecção (MOI) de 1. Após a infecção por 24 h, observamos que as pilhas infectadas SARS-CoV-2 mostraram uma intensidade significativamente aumentada da O-GlcNAcylation celular em comparação com o grupo não-infectado (Fig. 1a, SupplementFig. 1), indicando SARS-CoV-2 promove o metabolismo da HBP e a proteína O-GlcNAcylation nas pilhas do anfitrião. Isto é similar à nossa observação precedente na infecção do vírus do RNA, incluindo IAV e VSV.6 Como esperado, nós encontramos que GlcN aumentou significativamente o nível celular de O-GlcNAcylation e suprimiu substancialmente a réplica SARS-CoV-2 em pilhas epiteliais do pulmão infectadas como medido pela expressão da proteína spike SARS-CoV-2 (fig. 1a). Os títulos virais no sobrenadante foram significativamente reduzidos (P < 0,01) no grupo de tratamento com GlcN (fig. 1b). As medições do curso do tempo (6 a 24 h após a infecção) confirmaram ainda mais nossa observação, o tratamento com GlcN inibiu significativamente a replicação do SARS-CoV-2, consistente com a redução do título (fig. 1c, d).
Em relação à segurança, os autores não observaram citotoxicidade, independentemente da dose de D-glucosamina administrada. Ao mesmo tempo, observou-se que a D-Glucosamina também inibe a INFECÇÃO.
A fração de células infectadas foi quantificada. GlcN inibiu a infecção SARS-CoV-2 em pilhas de Calu-3 com um valor de EC50 de 11,82 mM (fig. 1e). A citotoxicidade do GlcN foi examinada em paralelo com a atividade antiviral. Não observamos citotoxicidade mensurável em todas as concentrações (Figura suplementar 1c). Estes resultados sugerem que o GlcN inibe eficazmente a replicação SARS-CoV-2 e a infecção in vitro.
No entanto, uma descoberta que os autores deram apenas uma frase para, eu acredito que poderia ser uma indicação de que a D-glucosamina pode ajudar aqueles com COVID longo e aflições induzidas pela proteína spike.
Em um esforço para compreender melhor o mecanismo antiviral de GlcN contra SARS-CoV-2, nós examinamos a resposta induzida do interferon SARS-CoV-2 na presença de GlcN. Observamos que o tratamento com GlcN resultou em um aumento considerável de IRF3 fosforilado e TBK1 fosforilado e, portanto, promoveu a sinalização de IFN em resposta ao SARS-CoV-2. Isso, por sua vez, diminuiu a expressão da proteína spike do SARS-CoV-2 no grupo de tratamento de GlcN (fig. 1f).
Claramente, estudos adicionais são necessários, e eu discutiria esses achados com seu PCP. Eu pessoalmente estarei adicionando GlcN ao meu regime.
Em relação à dosagem (novamente, não conselho médico, discutir qualquer suplemento com o seu PCP), vou deixar as palavras finais deste post para os autores do estudo.
Em geral, nosso trabalho demonstrou que o GlcN mostra a eficácia potencial contra HCoVs múltiplos, incluindo SARS-CoV-2, 229E e OC43 em ambos os modelos da infecção da pilha-baseada e do rato. A GlcN tem sido clinicamente aplicada para o tratamento da osteoartrite há mais de 50 anos. Como um suplemento de nutrientes, GlcN administrado por via oral em doses diárias que variam de 750 Para 3500 mg é bem tolerado em seres humanos. Dado o perfil de segurança e sua atividade anti-HCoVs de amplo espectro, o GlcN pode servir como uma droga promissora para prevenir a propagação do SARS-CoV-2 e suas variantes emergentes em populações saudáveis.
A administração oral de D-glucosamina confere proteção de amplo espectro contra coronavírus humanos, incluindo SARS-CoV-2.
https://www.nature.com/articles/s41392-023-01483-8