Por Vitor Schneider (Time 320)
Está exposto neste e-mail, que Anthony Fauci recebeu de Adam Gaertner, o método de produção da arma biológica que é o coronavírus. Está tudo exposto, tanto pelo título deste e-mail, como pela composição do método de preparo detalhados abaixo:
De: Adam Gaertner
Para: Anthony Fauci
11 de março de 2020
Assunto: Método de produção de arma biológica de coronavírus.
TRADUÇÃO:
Ola Anthony,
É assim que o vírus foi criado.
Fusão de intervenção. HIV-luc (ACE2) (500 ng de p24) foi misturado com 1.000 ng de p24 de partículas de HIV-gfp incorporando envelope ASLV-A, proteína SARS-Cov S (proteína Spike)ou ambos os envelopes em PBS a 4ºC por 30 min para permitir a ligação. As amostras foram elevadas a 37ºC por 15 min para permitir rearranjos conformacionais. Os vírions foram ajustados ao pH desejado com ácido cítrico 0,1 M. PBS. TPCK-tripsina (concentração final de 10 ml), CTSL, catepsina B (CTSB) (concentrações finais de 2 ml) ou CTSL guffer sozinho foi então adicionado. CTSL recombinante (R&D Systems) foi pré-ativado por incubação por 15 min a 10 ml em 50 mM Mes, 5 mM DTT, pH 5,0, por 30min a 25ºC. Após incubação de 10 min a 25ºC, a proteólise foi interrompida pela adição de 300 ml de DMEM10 contendo leupeptina (25 ml) e STI (75 ml). Os vírions foram então incubados a 37ºC por 30 min para permitir a fusão da membrana. 100 ml da mistura virion foram adicionados em quadruplicado a células HeLa-Tva pré-tratadas durante 1 h com leupeptina (20 ml). As células foram infectadas por spin e incubadas a 37ºC por 5 h.
Tradução: Vitor Schneider